【直播】我的基因组21:为什么我算出的染色体覆盖度与公司差异甚大

我们在第19讲留下了一个悬念:为什么我算的染色体覆盖度与公司给我的报告不符合!!

公司算出每条染色体的覆盖度都接近于100%了,而我是结果是:

很明显,chrY覆盖度严重偏低,21,22染色体也略堪忧。然而我对自己脚本能力及其有信心,反复检查觉得不可能写错。所以就理直气壮的写邮件咨询了给我测序的公司项目负责人~

他们反应挺迅速的,隔天就给我了答复:

邮件内容
曾老师:您好!

根据与信息同事沟通,分析您提出的问题,现解答如下:

老师您统计的length_of_chromosome的长度是全部的碱基的长度,其中包含N,而我们统计的染色体长度是去掉N的(如下图所示),所以老师统计出来的覆盖率偏低(如21,22号染色体);

Y染色体之所以更低是因为Y染色体中含有很多重复的序列,而我们做比对分析的时候是把这些mask掉了(如果把这些也算进来会造成multimap的比例较高,不利于后面的分析),所以用来计算覆盖率的Y染色体的长度比实际的短很多。

老师可以参考我们给出的染色体长度(下图)重新计算一下就可以得出统计图中的结果了。

也就是说,他们在算chrY的覆盖度的时候,不是把Y染色体的全长58M来做分母,而是只用了22.98M来做分母,这样就算出了超高的覆盖度,接近于100%!!!

先不论公司这样做对不对,我首先重复一下他们的分析结果再说,不就是去除参考基因组的N碱基长度嘛,我还专门写了一个帖子:统计各种参考基因组的各条染色体的N含量(http://www.biotrainee.com/thread-563-1-1.html

的确,这样统计数据马上就漂亮很多,也就有了公司给我的测序深度和覆盖度的图。数据统计如下:

如下图,可以直接在excel表格里面做出来的。

好了,这个问题说清楚了,继续前进!

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